自身免疫病是一类由机体免疫系统异常活化攻击自身组织引发的慢性疾病，包括类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）等，其诊断与病情监测高度依赖自身抗体检测。目前，酶联免疫吸附试验（ELISA）因特异性高、成本可控等优势，成为自身抗体检测的主流技术，而酶标仪作为ELISA的核心检测设备，其光学性能、温控精度及数据稳定性直接决定检测结果的可靠性。

一、材料与方法

（一）实验仪器

1、测试仪器：博清生物酶标仪。

2、对照仪器：某品牌酶标仪。

（二）实验试剂与样本

1、试剂：ANA、抗CCP、抗SSA、抗dsDNA ELISA 检测试剂盒，试剂均在有效期内，严格按照说明书配制。

2、样本：选取某风湿免疫科就诊患者240例（RA100例、SLE80例、SS60例），均符合国际通用诊断标准；健康对照者100例，来自某体检中心，排除自身免疫病及其他慢性疾病。所有样本均采集静脉血5mL，离心分离血清（3000r/min，10min），-20℃保存，避免反复冻融，检测前室温复融并充分混匀。

（三）实验步骤

1、样本处理：将所有血清样本按照1:100稀释（试剂盒推荐比例），每样本设置3个复孔。

2、ELISA 操作：严格遵循试剂盒说明书，依次完成加样（100μL/孔）、37℃孵育60min、洗涤液洗涤3次（300μL/孔，每次浸泡30s）、加酶标二抗（100μL/孔）、37℃孵育30 min、再次洗涤3次、加底物液（100μL/孔）、37℃避光显色15 min、加终止液（50μL/孔）。

3、酶标仪检测：分别使用博清生物酶标仪与对照仪器，在试剂盒推荐波长（ANA：450nm/630nm，抗CCP：450nm/630nm，抗 SSA：405nm/630nm，抗dsDNA：450nm/630nm）下检测吸光度值（A值），记录数据并通过仪器自带软件计算样本浓度及阳性判定结果（以A值≥cut-off值为阳性）。

（四）性能评估指标

1、准确性：计算两种仪器检测同一批样本（n=40）的A值相关性（Pearson相关系数），并以临床诊断结果为金标准，计算两种仪器的检测符合率（符合率=（真阳性+真阴性）/总样本数×100%）。

2、重复性：选取高、中、低3个浓度水平的质控样本（各10份），分别进行批内检测（同批次重复检测10次）和批间检测（连续10天检测），计算CV值（CV=标准差/均值×100%）。

3、稳定性：连续30天检测同一批质控样本（n=5），观察博清生物酶标仪A值的波动范围，评估长期运行稳定性。

（五）统计学分析

采用软件进行数据分析，计量资料以x±s表示，相关性分析采用Pearson检验，计数资料比较采用χ²检验，P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

（一）准确性分析

博清生物酶标仪与对照仪器检测4种自身抗体的A值均呈显著正相关，相关系数r均大于0.96，且两种仪器的阳性判定结果与临床诊断的符合率无显著差异（P>0.05），其中抗dsDNA检测符合率最高（98.1%），抗SSA检测符合率最低（95.3%），但均满足临床科研需求。

（二）重复性分析

博清生物酶标仪检测4种自身抗体的批内CV为2.8%~4.2%，批间CV为3.5%~5.0%，均显著低于临床允许的CV<10% 标准，且与对照仪器的CV值无显著差异（P>0.05），表明其重复性良好。

（三）稳定性分析

连续30天检测结果显示，博清生物酶标仪检测高、中、低浓度质控样本的A值波动范围均小于5%，且无明显漂移趋势，表明其长期运行稳定性良好，可满足连续科研实验需求。

三、讨论

自身抗体检测的可靠性是自身免疫病科研与临床诊断的核心前提，而酶标仪的性能是影响检测结果的关键因素。本研究从准确性、重复性、稳定性三个核心维度，系统评估了博清生物酶标仪在自身抗体检测中的应用价值，结果表明该仪器可达到主流进口仪器的检测水平，具体优势体现在以下三方面：

（一）准确性满足科研与临床需求

博清生物酶标仪与进口对照仪器的A值相关性系数均大于0.96，且与临床诊断的符合率超过95%，这一结果得益于其采用的双波长检测技术——通过主波长检测特异性信号，副波长（630nm）消除背景干扰（如血清浊度、孔壁污染），有效降低非特异性吸附带来的误差。此外，仪器的光学系统采用进口光栅，波长精度达±1nm，可精准匹配不同自身抗体ELISA试剂盒的推荐波长，进一步保证检测准确性。

（二）重复性与稳定性支撑实验可重复性

科研实验对数据的可重复性要求极高，本研究中博清生物酶标仪的批内CV<4.5%、批间 CV<5.0%，且30天连续检测无明显漂移，这与其高精度温控系统密切相关。该仪器采用底部加热方式，孵育温度控制精度达±0.1℃，可避免因温度不均导致的酶促反应差异；同时，其8通道同步检测设计可减少批次间操作误差，为大样本量科研实验（如自身抗体流行病学调查）提供稳定的数据支撑。

（三）国产优势助力科研成本优化

相较于进口酶标仪，博清生物酶标仪在价格上具有显著优势（约为进口仪器的1/2~2/3），且耗材兼容性强，可适配国内外主流ELISA试剂盒，无需依赖特定品牌耗材。此外，仪器配备的软件支持数据自动导出、批量样本分析及质控图生成，可简化科研数据处理流程，提高实验效率。

本研究仍存在一定局限性：首先，样本来源仅为单一中心，未来需通过多中心研究进一步验证仪器的普适性；其次，本研究仅评估了4种常见自身抗体，后续可扩展至抗核小体抗体（AnuA）、抗磷脂抗体（aPL）等更多靶点，全面覆盖自身免疫病检测需求。博清生物博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪在自身抗体检测中表现出良好的准确性、重复性及稳定性，与主流进口酶标仪性能一致，且在成本控制与操作便捷性上具有显著优势。该仪器可满足自身免疫病相关科研实验及临床检测需求，为国产酶标仪在自身抗体检测领域的应用提供了可靠证据，也为科研机构降低设备成本、提升实验效率提供了新选择。